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细胞合成培养基的配制步骤及注意事项

点击次数：3506 发布时间：2022/3/10 13:53:49

虽然各种培养基的组成各有不同，但商品化的干粉型培养基的配制方法大同小异。绝大多数合成培养基的生产都已标准化、商品化，较为常用的培养基可在市场上购得。这种干粉型培养基性质稳定，便于储存、运输，价格便宜，为使用和配制合成培养基带来很大方便。特殊需求也多可在现有合成培养基基础上补加或调整某些成分予以满足。以往实验室自购各个组分，称量后再按一定顺序进行溶解配制的老方法，一方面需购置大量各种各样的成分，而且每种成分用量很少，很难控制和统一；另一方面要称量，顺序溶解，步骤繁琐，质量难以确定。因此，自行配制培养基的方法除了因需要而门配制一些特殊培养基外，大部分已不再使用。

1.配制用品
滤器、微孔滤膜、磁力搅拌器、O2、天平、烧杯、量筒、贮液瓶、瓶塞、注射器、pH计、NaHCO3、培养基、三蒸水、胎牛（小牛）血清、NaOH、 HCI、青霉素、链霉素。

2.配制步骤
①将干粉型培养基溶于欲配制液体总量2/3的三蒸水，冲洗包装袋两次倒入培养液中，加人磁性搅棒并置于磁力搅拌器上充分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解。
②按照产品包装说明的要求和实验需要补加 NaHCO3和谷氨酰胺。
③加入抗生素：终浓度为青霉素100U/mL，链霉素100ug/mL。（一般市售的青霉素为80万单位/瓶，将其溶解于4 mL三蒸水中，每升培养液中加人0.5 mL；市售链霉素为1g/瓶，将其溶解在5mL中，每升培养液加人0.5 mL。）
④加入所需浓度的经56℃水浴灭活的胎牛（或其他）血清，补加三蒸水至终体积。（目，血清均经过无菌处理。）
⑤调整培养液pH值：一般情况下市售干粉型培养基溶解后，pH值都有一相对稳定的数值，但某些因素例如配制液体使用的三蒸水、加人不同浓度的血清、采用CO2加压过滤等，有可能使所配制液体的pH有所改变。因此，配制过程中，应强调采用新鲜制备的三蒸水并在加人血清后调整pH值，过滤除菌时宜采用O2加压过滤。常规配制培养液时pH值常略偏碱，可采用HCI溶液进行调整，使用时可将预先配制的HCI溶液逐滴缓慢加入欲调整的偏碱的液体中并搅拌均匀，用pH计或pH精密试纸观察调整结果达到pH7.2~7.4。
⑥将上述溶液用过滤法消毒除菌。所使用的滤器采用0.22 um和0.45 um滤膜各1张，常规高压灭菌消毒。
⑦将经过滤除菌的培养液分装于贴有标签的无菌贮液瓶中，加盖瓶塞，加封75%乙醇浸泡的玻璃纸，4℃存放。

3.注意事项
①配制培养液以及调节培养液pH值所使用的HCl和 NaOH等溶液需新鲜制备的三蒸水，一般于配制当天制备，以确定水的纯度和质量。
②配制培养基的各种器皿都应清洗，烤干后备用。
③培养液配制过程中一般不需加热助溶。
④培养液配制后应进行无菌试验，以检测培养液是否有污染。配制培养液所需血清的质量应保持稳定，同一项实验应尽可能采用同一批号血清。
⑤每批次配制液体数量以使用2周左右为宜，以免时间过长造成营养成分损失。

原创作者：武汉PG电子代理生物技术有限公司